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酶联法测定艾滋病毒详细说明

[编辑:艾滋病自测网] [更新日期:2017-09-16 19:00:44] [来源:互联网资讯] [浏览量:99+]

                              酶联法

酶联法即酶联免疫吸附试验是检测艾滋病的一种固相免疫测定技术,其先将抗体或抗原包被到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。这种方法简称ELISA。酶联免疫吸附试验是一种固相免疫测定技术,其先将抗体或抗原包被到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。

测定时,将待检样本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应,后加入酶标抗体与免疫复合物结合,用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离的未结合成分,最后加入酶反应底物,根据底物被酶催化产生的颜色及其吸光度(A)值的大小进行定性或定量分析的方法,步骤其实很简单:ELISA用血清来检测,首先血液要经过至少半个小时的凝集,然后取血清。

将酶复合物用稀释液稀释后,加血清及阴性、阳性对照,还有就是质控品,这是严格的要求,它的范围必须在质控范围内。

经过一个小时的孵育,然后洗板,加底物,半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分,然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。

酶联法的原理

酶联法的原理是在包被板上包被抗原后,通过抗原抗体反应使酶标抗体结合到载体上,经洗涤使结合的酶标抗体和游离的酶标抗体分离,洗去游离的酶标抗体,加入底物显色,根据颜色深浅进行定性或定量分析。(就是把抗原固定在板上,然后加血清,如果有感染就形成抗原抗体结合物,再加酶标抗原,形成抗原抗体抗原复合物,加显色剂显色)

酶联法检测人类免疫缺陷病毒

[测定方法] ELISA法

[方法学原理]在微孔板上预包被高纯度基因重组HIV(1型十Ⅱ型),与样品中抗HIV抗体反应,同时加入HRP标记HIV(1型+Ⅱ型)抗原。然后用TMB底物作用显色。通过酶标仪检测吸光度(OD值)从而判定样品中HIV抗体的存在与否。

[标本准备] 静脉抽血2ml,不抗凝

[试剂]

1.预包被微孔反应板条

2.酶标试剂

3.阴性对照

4.阳性对照

5.洗涤液

6.显色剂A、B

[仪器设备] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。

[测定步骤]

1.将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照3孔,阳性对照2孔,空白1孔。

2.每孔加人酶标试剂100~1,空白孔除外。

3.分别在相应孔中加入待测样品或阴性对照、阳性对照20ul,振荡混匀。37℃环境中温育60min。

4.弃去孔内液体,用洗涤液充分洗涤6遍,最后一次尽量拍干。

5.每孔加人显色剂A、B液各50u1,轻轻振荡混匀,置37℃环境中避光显色10min。

6.每孔加终止液50gl,轻轻振荡混匀,设定酶标仪波长450nm(建议用双波长检测)测定各孔吸光度。

7.结果判定 样品OD值≥临界值(cut off)者为HIV抗体初筛阳性(注意:初筛阳性标本应重新取样品进行双孔复试,复试阳性者应按“全国HIV检测管理规范”送HIV确认实验室进行确认试验)。样品OD值<临界值(cutoff)者为HIV抗体阴性。

酶联法优点

酶联法多用于对人群的批量筛检,每一块酶联板一次可以检测92人份样品,其单人的价格就相对便宜一些。但是,若一块板子只用于检测10人以内,则价格又太贵。并且操作步骤多,必须有专业人员完成。而试纸检测方法操作简单方便快捷,一般10-20分钟出结果,可以做到足不出户检测艾滋,判断结果方便,个人可以完成,无须专业人员,所以试纸较酶联相对贵一些是有道理的。

 



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